
阴道外组织是由正常的人类来源的阴道上皮细胞和树突状细胞培养而成. 其高度分化的结构与体内组织相似,是女性卫生毒性研究的理想选择, 阴道护理, 和杀微生物剂产品. 四种类型的外阴道提供:
1) VEC-100(图1):含有VEC上皮细胞的上皮组织,
2) VLC-100(图1):含有上皮VEC和免疫活性树突状细胞的上皮组织,
3) VEC-100- ft(图2):全层的VEC-100,包括VEC上皮细胞和含有成纤维细胞的固有层, 和
4) VLC-100-FT(图2):vecc -100- ft的免疫功能版本,包括树突状细胞.
图1:H&E染色的组织学(福尔马林固定)横截面A) VEC-100体外重建包含正常人VEC细胞的上皮组织模型, B)阴道外植体组织. 在体外和体内的组织都显示有核的基底和基底上细胞层,然后是细胞核缺失和细胞充满糖原的层.
图2:H&组织学(福尔马林固定)全层阴道外组织横断面E染色. VEC-100- ft组织由培养在含有成纤维细胞的固有层(LP)样胶原基质上的VEC上皮细胞组成. VLC-100-FT由上皮层的VEC上皮细胞和树突状细胞组成,并在LP中包含成纤维细胞和树突状细胞.
图3:细胞角蛋白免疫染色的VEC-100组织的福尔马林固定横断面, CK13, CK14, & CK18. Basal cells are stained by CK14 和 supra-basal cells by CK13; no cells are stained by CK18.
图4:与含有常见杀精剂的制剂接触18小时后,阴道外全层(VEC-100-FT)组织模型的活力(A)和细胞因子释放(B), 壬二醇-9 (N9): a) PBS对照, b) KY果冻(KY), c) KY有2% N9号(2% N9号), 和d) 0.1%的N9号PBS (0.1% N9). 注:随着组织活力的降低,IL-1β的释放增加.
图5:局部暴露(24小时)至60小时后VLC-100组织的HIV-1感染,000 CPM的HIV-1 ADA或NL4-3病毒. 暴露后,组织洗3次,然后再培养24小时. 然后提取细胞DNA,使用HIV-1 gag特异性引物对检测HIV-1转录本.
图6:RT - PCR显示toll样受体(TLR)表达:A)器官型阴道-宫颈外位(VEC)组织模型和B)人宫颈组织外植体.
组织
包: 阴道外检测试剂盒VEC-100包含24个组织, VEC-112包含12个组织,VEC-606包含6个组织. (组织“套件”包含组织, 少量培养基:少量培养基, 和 plasticware; contact yobo体育 for specific kit contents.)
基质: 使用单孔组织培养板插入片.
vec - 100: Nunc™单孔组织培养板插入件. 孔径= 0.4µm,内径= 0.80厘米,表面积= 0.5 cm2.
vec - 606: 聚碳酸酯单孔组织培养板插入件,Nunc™. 孔径= 0.4µm,内径= 2.5厘米,表面积= 4.2 cm2.
文化: 在气液界面.
组织学: vec - 100: 10-16层非角化组织.
很多数字: 每个技术员每周生产的组织批次被分配一个特定的批号. 通常,任何一周的组织生产都有多个批号. 一个字母被附加在批号的末尾,以区分在给定的许多组织中的单个试剂盒. 所有的组织试剂盒在细胞方面都是相同的, Medium, 处理, 培养条件, 等.
装运: 在4°C中补充琼脂糖凝胶.
装运: 周一.
交付: 周二上午通过联邦快递优先服务(美国). 美国以外:周二至周四,取决于地点.
保质期: 包括运输时间在内,组织可在使用前在4°C保存4天. 然而,除非绝对必要,否则不建议延长储存期. 除了, 如果组织在同一天连续使用,可获得最好的重现性, e.g. 周三早上,在4°C下过夜.
长度的实验: 可持续培养至少1周,正常形态保持良好. 培养物必须每隔一天喂5次.0 ml维持液(vec - 100毫米). 细胞培养插入物放置在6孔板的培养架(部件号MEL-STND)或垫圈(部件号EPI-WSHR)上,以允许使用5个孔.0 ml.
替代组织:
VEC-100- ft:类似于VEC-100,除了在胶原/阴道成纤维细胞底物(固有层)上生长的组织。.
VEC-112-FT:类似于VEC-100-FT,除了12个组织.
VLC-100:类似于VEC-100,只是组织中含有朗格汉斯细胞.
VLC-112:类似于VLC-100,除了12个组织.
VLC-100- ft:类似于VLC-100,除了组织生长在胶原/阴道成纤维细胞底物(固有层)上。.
VLC-112-FT:类似于VLC-100-FT,除了12个组织.
细胞
类型: 正常人子宫颈外细胞(NHEC)分化成无角化的组织, 阴道-外宫颈表型(部分编号vec100).
基因组成: 单一捐赠者.
来自: 成人子宫外组织.
筛选: HIV,乙型肝炎,丙型肝炎,支原体,细菌,酵母,真菌.
Medium
基础培养基: 杜尔贝科改进型鹰式中舰(DMEM)和F12中舰.
生长因子/激素: 表皮生长因子及其他专有因子.
血清: 没有一个.
抗生素: 庆大霉素5µg/ml(庆大霉素正常水平的10%).
抗真菌剂: 两性霉素B 0.25µg / ml.
酸碱指示剂: 酚红.
其他添加剂: 专有的.
选择: 无酚红,无抗生素,无真菌培养基和组织是可用的. 代理在装运前3天被移除.
维护中: vec - 100毫米
质量控制和无菌
目视检查: 所有组织都要进行目视检查,如果发现了物理缺陷, 组织被拒绝装运.
最终用途测试: 每个批次的组织活力由MTT测定法确定. 组织暴露于1.0% Triton X-100 30 60和120分钟. 确定使用MTT法降低组织活力(ET-50)所需的暴露时间. 将存活率降低到50% (ET-50)所需的暴露时间必须为0.92 – 1.67小时. 应客户要求,将QC测试结果汇总提供给客户参考. (对于TEER测量,yobo体育已经成功地使用了WPI Endohm系统.)
不育: 在整个生产过程中使用的所有培养基都要进行无菌检查. 维持培养基加抗生素和不加抗生素孵育1周,检查无菌情况. 来自24孔板的用于运输的琼脂糖凝胶也被培养1周,并检查任何污染的迹象.
筛查病原体: 对所有细胞进行筛选,并使用PCR检测艾滋病毒、乙型肝炎和丙型肝炎均为阴性. 然而,没有任何已知的测试方法可以完全保证这些细胞是无病原体的. 因此, 这些产品和所有人类衍生产品应按照CDC-NIH手册建议的BSL-2级别(生物安全级别2)或更高级别进行处理, "微生物和生物医学实验室的生物安全,” 1998. 如需进一步协助,请联系您的现场安全主任或yobo体育技术服务.
批不合格通知书: 如果组织批次没有通过我们的质量控制或无菌测试, 顾客会得到通知,并在适当的时候免费更换纸巾. 因为我们有些质量控制和无菌测试是在出货后进行的, 我们会尽快通知你. (正常情况下,ET-50故障将于周四下午5点前通知.m.; sterility failures will be notified within 8 days of shipment.)